Reakcie bielkovín: NaOH, biuretová a xantoproteínová reakcia
Makromolekulu bielkovín tvorí reťazec aminokyselín. Farebné reakcie spôsobujú radikály, ktoré sa na peptidových väzbách nezúčastňujú, preto tieto reakcie nie sú prísne špecifické. Medzi dôležité reakcie bielkovín patrí biuretová a xantoproteínová reakcia.
Biuretová reakcia
Názov "biuretová reakcia" je odvodený od biuretu, ktorý vzniká zohrievaním močoviny, pričom sa uvoľňuje amoniak. Skúmaný extrakt sa sfarbí na červeno (príp. až na purpurovo).
Princíp biuretovej reakcie:
Biuretová reakcia je chemická reakcia používaná na detekciu prítomnosti peptidových väzieb, ktoré sa vyskytujú v proteínoch. Pri tejto reakcii sa peptidová väzba komplexuje s iónmi medi (Cu2+) v alkalickom prostredí, čo vedie k vzniku fialového komplexu. Intenzita fialovej farby je priamo úmerná koncentrácii proteínov v roztoku, čo umožňuje kvantitatívne stanovenie proteínov pomocou spektrofotometrie.
Postup pri biuretovej reakcii:
- K roztoku obsahujúcemu proteíny sa pridá silná báza, napríklad hydroxid sodný (NaOH), aby sa vytvorilo alkalické prostredie.
- Následne sa pridá roztok síranu meďnatého (CuSO4).
- Pozoruje sa zmena farby roztoku. Ak sú prítomné proteíny, roztok sa sfarbí do fialova.
Xantoproteínová reakcia
V molekule bielkovín sú viazané aromatické aminokyseliny (tyrozín, tryptofán, fenylalanín) s benzénovým jadrom. Jadro sa kyselinou dusičnou HNO3 nitruje za vzniku na žlto sfarbených zlúčenín.
Realizácia xantoproteínovej reakcie:
- Do 2 cm3 extraktu pridajte 1 cm3 kyseliny dusičnej HNO3.
- Roztok zahrejte.
Príprava extraktu pre xantoproteínovú reakciu:
- Olúpaný surový zemiak postrúhajte a v roztieračke roztierajte niekoľko minút.
- Kašovitú masu vložte do handričky a vytlačte z nej kalnú šťavu.
Pomôcky:
- Skúmavka s extraktom bielkoviny
- 2 sklenené tyčinky
Zhrnutie:
Xantoproteínová reakcia je kvalitatívny test na prítomnosť aromatických aminokyselín v proteínoch. Reakcia je založená na nitrácii benzénových jadier aromatických aminokyselín koncentrovanou kyselinou dusičnou, čo vedie k vzniku žltých nitrovaných produktov. Pridanie zásady, ako je hydroxid sodný (NaOH), po nitrácii môže spôsobiť zmenu farby na oranžovú.
Tabuľka: Rozdiely medzi biuretovou a xantoproteínovou reakciou
| Reakcia | Princíp | Použité činidlo | Pozitívny výsledok |
|---|---|---|---|
| Biuretová reakcia | Detekcia peptidových väzieb | CuSO4 v alkalickom prostredí (NaOH) | Fialové sfarbenie |
| Xantoproteínová reakcia | Detekcia aromatických aminokyselín | HNO3 | Žlté sfarbenie (po pridaní NaOH oranžové) |
Ako interpretovať zmenu farby biuretu
tags: #naoh #vajcovy #bielok #reakcia


